由网友(嗜好)分享简介：简介DNA提炼试剂盒是按照氯化芐法构修的，可以或许从样原中提炼基果组DNA的试剂盒。氯化苄具备能将含有纤维艳等的粗胞壁中的羟基苄基化，进而粉碎粗胞壁的特征。原成品哄骗了氯化苄的那1特征，将动物样品解冻融解后，再应用Pipet Tip的尖端将动物样品正在Microtube壁上数次按压便可粉碎粗胞壁。原法取传统要领比拟，省来了液...

简介

DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化，从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化苄的这一特性，将植物样品冻结融解后，再使用Pipet Tip的尖端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于一次性处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。

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保存方式

室温。低温保存可能会有沉淀析出。如果发生析出现象，请于50℃溶解后，再于室温保存。

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操作方法

全套操作约需1小时，分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤，详细说明如下。

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匀浆和细胞裂解:

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使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤，具体说明如下：

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【从动物组织中提取基因组DNA】

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使用研钵进行匀浆时：

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① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。

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注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。

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A．富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。

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B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。

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C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。

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② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。

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注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。

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③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。

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使用研磨棒进行匀浆时:

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① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。

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② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。

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③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。

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【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】

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① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。

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植物材料种类

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植物材料使用量*

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植物花、叶片

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10～100 mg

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植物茎

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60～240 mg

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植物根

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80～240 mg

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植物种子

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80～240 mg

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* 如选取植物的根、种子等样品时，因其基因组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。

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如从培养的植物细胞中提取基因组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。

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注）样品研磨应充分，否则将会严重影响基因组DNA的收率。

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② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。

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③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。

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注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。

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【从全血中提取基因组DNA】

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① 取10～250 μl的全血（含抗凝剂）加入至Collection Tube中。

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② 加入500 μl的Solution A。

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③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟后，冰浴5分钟。

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注） 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl；禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。

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【从培养细胞中提取基因组DNA】

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三.使用悬浮培养的动物细胞时：

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① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的细胞悬浮液，5,000 rpm离心5分钟，弃上清（细胞培养液）。

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② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。

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③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。

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四.使用贴壁细胞时：

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① 弃尽培养液，向培养皿中加入650 μl的Solution A，室温静置1分钟。

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注）96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时，请分数次处理细胞。

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② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞，取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。

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③ 加入0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。

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2. 加入400 μl的Solution B，振荡混合。

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3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。

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4. 弃去上层有机相，再加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。

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5. 弃去上层有机相，然后将水相溶液（无色下层）转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中，12,000 rpm离心1分钟。

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注）有机相（上层）带有颜色，请务必除尽，否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑，在过滤时将被去除。

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6. 弃Filter Cup，在滤液中加入400 μl的DB Buffer，混合均匀。

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7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。

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8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。

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9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。

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注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。

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10. 重复操作步骤9。

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11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。

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注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。

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12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。

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如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置，可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。

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7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上，将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中，开启调节负压装置，缓慢吸走Spin Column中的溶液（流速控制在1滴/秒）。

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8. 将负压调至最大，向Spin Column中加入500 μl的Rinse A，吸尽Spin Column中溶液。

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9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B，吸尽Spin Column中溶液。

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注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。

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10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column，将其安置于试剂盒中的Collection Tube上，12, 000 rpm离心1分钟。

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11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。

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注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。

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12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。

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分类

DNA提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组DNA提取试剂盒、中量全血基因组DNA提取试剂盒、组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、CTAB植物基因DNA提取试剂盒、新型植物基因组DNA提取试剂盒、酵母基因组DNA提取试剂盒、M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒。